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        坎氏弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

        • 更新時間:  2020-06-03
        • 產品型號:  50T
        • 簡單描述
        • 坎氏弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
        詳細介紹

        產品名稱

        坎氏弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

        英文名稱

        Vibrio campbellii

        貨號

        CP934865

        儲存條件:

        14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
        1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
        2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
        3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
        4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
        5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

        探針法:

        坎氏弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
        使用方法:
        一、樣品DNA的制備
        用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
        二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
        1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
        2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
        3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
        4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
        5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
        6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
        7. NC管中不加任何陽性對照。
        8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
        探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

        應用案例:
        樣品 DNA 的制備
        1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
        稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
        2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
        3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
        4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
        6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
        7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
        8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
        9.在 PCR 管中加入下列成分。
        以下是公司正在熱銷的產品:

        NUDC  細胞核分離基因C蛋白抗體TCBS 瓊脂平板

        Nucleostemin  核干細胞因子抗體(鳥嘌呤核苷酸結合蛋白3)化鈉營養瓊脂

        Nucleoprotein/NP  A型流感病核蛋白抗體革蘭染色液

        Nucleoprotein TPR  核蛋白易位啟動子區域TPR抗體氧化酶試紙

        Nucleoporin p62  核孔糖蛋白P62抗體氧化酶試

        Nucleophosmin  核仁酸蛋白抗體化鈉三糖鐵瓊脂

        Nucleolin/C23  核仁蛋白C23抗體培養基

        Nucleolar protein 3/Apoptosis repressor with CARD  核仁蛋白3抗體化鈉三糖鐵瓊脂斜面(限供汽運)

        坎氏弧菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒Nuclear Matrix Protein p84/NMP84   核基質p84蛋白抗體賴氨酸脫羧酶化鈉肉湯(LDC)

        NUCKS1  核酪蛋白激酶和細胞周期蛋白依賴性激酶底物1抗體鳥氨酸脫羧酶化鈉肉湯(ODC)

        NUBP2  核苷酸結合蛋白2抗體精氨酸雙水解酶化鈉肉湯(ADH)

        NUBP1  核苷酸結合蛋白1抗體氨基酸試驗對照

        NUAK2  SNF1/AMP激酶相關激酶2抗體無菌液體石蠟

        NTN3/Netrin-3  軸突生長誘導因子3抗體化鈉溶液

        Ntn1  軸突導向因子1抗體β-半乳糖苷酶試玻璃珠法柱式真菌DNAoutGlassbeads Column Fungal DNAOUT常溫50次

        玻璃珠法柱式酵母DNAout50次

        玻璃勻漿器,5 mLGlass Homogenizer常溫保存1套

        玻璃勻漿器,2 mLGlass Homogenizer常溫保存1套

        玻璃勻漿器,10 mLGlass Homogenizer常溫保存1套

        玻璃勻漿器,1 mLGlass Homogenizer常溫保存1套

        病沉淀Virus Precipitation Reagent4℃保存100mL

        型脊髓灰質炎病PCR檢測試盒低溫運輸,-20℃保存50T

        型肝炎病PCR基因分型測定試盒低溫運輸,-20℃保存50T

        烯酰胺Acrylamide密封陰涼保存100g

        注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。


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